Cách Chọn Các Hạn chế Enzyme

Video hướng dẫn sử dụng Vital Enzyme's tại QH H'RAI

Video hướng dẫn sử dụng Vital Enzyme's tại QH H'RAI
Cách Chọn Các Hạn chế Enzyme
Cách Chọn Các Hạn chế Enzyme
Anonim

Các enzyme hạn chế là các enzyme cắt cả DNA đơn và hai sợi. Mỗi enzyme hạn chế có một trình tự nucleotide cụ thể, được gọi là một vị trí hạn chế, nó nhận ra và cắt bỏ. Các enzyme hạn chế được sử dụng để phân tích ADN, phân tích đột biến, nhân bản và khuếch đại DNA. Các nhà khoa học sử dụng các enzyme hạn chế để chèn các gen quan tâm vào các vec tơ biểu hiện, các phân tử DNA có thể tái tạo riêng biệt với DNA nhiễm sắc thể. Các vector có chứa các gen quan tâm sau đó có thể được đưa vào một dòng vi khuẩn để biểu hiện và đặc trưng của protein.

Video của Ngày

Bước 1

Xác định các trang web enzyme hạn chế trên vectơ của bạn bằng cách xem bản đồ hạn chế. Bản đồ hạn chế sẽ cho bạn biết enzym nào sẽ cắt vector của bạn, và ở đâu.

Bước 2

Chọn một enzyme hạn chế cũng có một vị trí có trong chèn gen của bạn, bằng cách nhìn vào chuỗi các chèn. Đảm bảo vị trí hạn chế ở vị trí trên chèn của bạn nằm ngoài gen được quan tâm, do đó bạn không bị mất bất kỳ phần nào của gen.

Bước 3

Đảm bảo rằng không có bản sao của vị trí hạn chế bất cứ nơi nào trong gien chèn hoặc vector của bạn. Điều này sẽ gây ra nhiều vết cắt trong DNA của bạn và cung cấp cho bạn dữ liệu gây hiểu nhầm.

Bước 4

Cố gắng lựa chọn các enzyme hạn chế cắt bằng các đầu dính, chứ không phải là các đầu cùn. Kết thúc dính đã xảy ra khi enzym cắt đoạn DNA kép theo một cách lảo đảo, để lại một đòn bẩy duy nhất để tạo điều kiện gắn kết với một chèn cắt theo cách ngược lại. Các đầu gối xuất hiện khi DNA hai mặt bị cắt một cách trơn tru, và chúng khó gắn kết hơn.

Chọn một enzyme hạn chế khác cho cả hai đầu của chèn của bạn để đảm bảo nó được đưa vào vector theo đúng hướng và để đảm bảo rằng vectơ không gắn lại với chính nó.

Bước 6

Cố gắng chọn hai enzyme hạn chế hoạt động tốt trong cùng một hệ đệm và nhiệt độ. Nếu không thể, hãy chạy mỗi lần tiêu hóa riêng.

Những điều bạn cần

Trình tự chèn gen

  • Bản đồ hạn chế cho vector lựa chọn
  • Danh sách các enzyme hạn chế và các trang cắt
  • Các mẹo

Một số chương trình web đã được phát triển để xác định hạn chế các vị trí trên một chuỗi DNA nhanh chóng. Một chương trình như vậy là từ New England BioLabs.